Veirukjarnsýrugreining

Erfðafræðileg röð flestra vírusa hefur verið þekkt.Kjarnsýrunemar sem eru stuttir hlutar af DNA sem eru hannaðir til að blanda saman við viðbótar veiru DNA eða RNA hluta.Pólýmerasa keðjuverkun (PCR) er skilvirkari tækni til að greina veiru.Greiningaraðferðir með miklum afköstum hafa verið þróaðar að undanförnu.

A. Kjarnsýrublendingartækni

Kjarnsýrublending, aðallega þar á meðal Southern blotting (Southern) og Northern blotting (Northern), er hröð þróun ný tækni á veirugreiningarsviði.Rökin fyrir blendingarprófuninni eru að nota stutta hluta af DNA (kallaðir „probe“) sem eru hannaðir til að blanda saman við viðbótar veiru DNA eða RNA hluta.Með upphitun eða basískri meðhöndlun er tvíþátta mark-DNA eða RNA aðskilið í staka þræði og síðan fest á föstu burðarefni.Eftir það er rannsakandi bætt við og blandað við mark-DNA eða RNA.Þar sem rannsakarinn er merktur með samsætu eða ógeislavirkum kjarna, er hægt að greina mark-DNA eða RNA með sjálfsmyndatöku eða með bíótín-avídínkerfinu.Þar sem flest erfðamengi veiru hafa verið klónuð og raðgreind er hægt að greina þau með því að nota veirusértækar raðir sem rannsaka í sýninu.Eins og er, innihalda blendingaraðferðirnar: punkta blot, in situ blending í frumum, DNA blotting (DNA) (Southern blot) og RNA blotting (RNA) (Northern blot).

B.PCR tækni

Á undanförnum árum hefur verið þróuð röð af in vitro kjarnsýrumögnunaraðferðum sem byggja á PCR, til að prófa ónæmar eða óræktanlegar veirur.PCR er aðferð sem getur myndað sérstaka DNA röð með in vitro pólýmerasa viðbrögðum.Ferlið við PCR felur í sér varma hringrás í þremur þrepum: afeðlun, glæðingu og framlengingu.síðan við lágt hitastig (37 ℃ ~ 60 ℃), sameinast tveir tilbúnir núkleótíð frumur við viðbótar DNA hlutana;en við viðeigandi hitastig fyrir Taq ensím (72 ℃) byrjar nýmyndun nýrra DNA keðja frá grunni 3'enda með því að nota complementary DNA sem sniðmát og einstök núkleótíð sem efni.Svo eftir hverja lotu er hægt að magna eina DNA keðju í tvær keðjur.Með því að endurtaka þetta ferli er hægt að nota hverja DNA keðju sem er mynduð í einni lotu sem sniðmát í næstu lotu og fjöldi DNA keðja er tvöfaldaður í hverri lotu, sem þýðir að framleiðsla á PCR er magnaður upp á 2n log hraða.Eftir 25 til 30 lotur er framleiðsla PCR auðkennd með rafdrætti og hægt er að fylgjast með sértækum DNA afurðum undir UV ljósi (254nm).Til að nýta sér sérhæfni, næmi og þægindi hefur PCR verið notað við klíníska greiningu á mörgum veirusýkingum eins og HCV, HIV, CMV og HPV.Þar sem PCR er mjög viðkvæmt, getur það greint vírus DNA á fg stigi, ætti að framkvæma aðgerðina mjög varlega til að forðast falskar jákvæðar.Að auki þýðir jákvæð niðurstaða í kjarnsýruprófi ekki að það sé lifandi smitandi veira í sýninu.

Með víðtækri beitingu PCR tækni eru nýjar aðferðir og aðferðir þróaðar byggðar á PCR tækni í mismunandi prófunartilgangi.Til dæmis getur rauntíma magn PCR greint veiruálag;in situ PCR er notað til að bera kennsl á veirusýkingu í vefjum eða frumum;Hreiður PCR getur aukið sértækni PCR.Meðal þeirra hefur rauntíma magn PCR verið þróað hraðar.Margar nýjar aðferðir, eins og TaqMan vatnsrofsnemi, blendingarnemi og sameindavitarannsóknir, hafa verið sameinaðar í rauntíma megindlega PCR tækni, sem er mikið notuð í klínískum rannsóknum.Auk þess að bera kennsl á veiruálag í líkamsvökva sjúklinga nákvæmlega, er einnig hægt að nota þessa aðferð til að greina stökkbrigði sem þola lyf.Þess vegna er rauntíma magn PCR aðallega beitt við mat á læknandi áhrifum og eftirlit með lyfjaþoli.

C. Uppgötvun veirukjarnasýra með miklum afköstum

Til að mæta þörfum fyrir hraða greiningu á nýjum smitsjúkdómum, hefur verið komið á ýmsum aðferðum til að greina mikla afköst, eins og DNA-flögur (DNA).Fyrir DNA-flögur eru sérstakir rannsakar framleiddir og festir við litla sílikonflögur í mjög miklum þéttleika til að mynda DNA-nema örfylki (DNA) sem hægt er að blanda saman við sýni.Merkið um blendinguna er hægt að mynda með confocal smásjá eða leysiskanni og hægt er að vinna það frekar í tölvunni og fá risastórt gagnasett um mismunandi gen.Það eru tvær tegundir af DNA flísum.„Nýmyndaflísið“ er sem hér segir: sértæku fákirnin eru mynduð beint á flögurnar.Annar er DNA laug flís.Klónuðu genin eða PCR-afurðirnar eru prentaðar með skipulegum hætti á glærunni.Kosturinn við DNA flís tækni er samtímis uppgötvun á gríðarlegu magni af DNA röðum.Nýjasta útgáfan af sýklauppgötvunarflís getur borið kennsl á yfir 1700 vírusa í einu.DNA flís tækni leysti vandamál hefðbundinna kjarnsýrublendingaraðferða og hefur mjög víðtæka notkun í veirugreiningu og faraldsfræðilegum rannsóknum.